褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节和生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究

【摘要】奶水牛和生猪是国家鼓励和优先发展的两大产业。开发提高水牛繁殖力和猪生长速度的新技术,是促进上述两大产业发展的重要举措。为了：①探讨水牛卵泡发育的调节机制,促进水牛繁殖新技术的发展；②优化生长抑素基因免疫程度,分析该疫苗的生物安全性,促进该疫苗的推广应用本研究利用。因此本研究从褪黑激素对水牛卵泡颗粒细胞体外调节、生长抑素基因免疫程序优化与安全性评定等角度开展研究,主要内容和结果如下：1.褪黑激素对水牛颗粒细胞的调节及其作用机制研究褪黑激素(MLT)受光信号控制,对生殖系统、特别是卵巢功能具有调节作用。MLT对水牛卵泡发育是否有调节作用,尚不清楚。本实验从颗粒细胞的褪黑激素受体表达、调节及外源MLT对水牛颗粒细胞凋亡、增殖与激素分泌等方面进行了研究,主要内容和结果如下：(1)提取水牛颗粒细胞RNA,经反转录获得细胞cNDA,并成功扩增出MT1受体特异性条带,表明水牛颗粒细胞表达褪黑激素受体。(2)将水牛颗粒细胞用含低(0.1nM)、中(1nM)、高(100nM)剂量MLT的培养液处理24小时,在mRNA水平检测MTl及相关受体的表达情况,结果发现,MT1受体表达在各浓度MLT作用下明显上调,FSH和GnRH受体表达显著下降,LH受体表达在高剂量组显著上调,中、低剂量组无显著变化。(3)用MLT处理水牛颗粒细胞24h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖情况,发现与对照组相比,高剂量组的细胞凋亡显著减少,中、低剂量组组无明显差异；另外,中、高剂量组细胞增殖明显高于对照组,低剂量组与对照组无显著差异。用WesternBlot检测细胞相关调控因子,发现中、高剂量组中bcl2表达显著上调,高剂量组中caspase3、p21和p27表达明显下降,这与流式检测结果一致。测定培养液中雌激素和孕激素浓度,发现高剂量组的孕激素分泌明显减少,而各组的雌激素分泌量变化不明显。2.生长抑素基因疫苗免疫程序及安全性研究本研究选择45日龄杜长大三元杂交猪25头,分成5组,从免疫原(Pcs/2SS)剂量(0.5mg,1.0mg,2.0mg)和免疫方式(电转化和肌肉注射)以及安全性评价等方面着手,比较了各种剂量、两种给药方式的免疫和促生长效果,分析了目的基因整合情况,结果如下：(1)免疫质粒后,实验组猪均有抗体产生,表明疫苗引发了机体的免疫应答。在初次免疫和加强免疫第2周,抗体阳性猪比例最高,加强免疫后体内抗体水平的维持时间与初次免疫相比明显增长。同时,在加强免疫后的第2周生长速度也达到高峰,但各组动物激素内分泌水平与对照组并无差异。(2)试验猪达到出栏体重后屠宰,采集脂肪和肌肉,提取组织DNA,检测质粒整合,结果显示各组均为阴性,说明质粒未整合到动物基因组内,因而认为该疫苗是安全的。
【作者】种振路；
【导师】杨利国；
【作者基本信息】华中农业大学，动物遗传育种与繁殖，2014，硕士
【关键词】水牛颗粒细胞；周期凋亡；褪黑激素受体；Pcs/2SS质粒；电转化；免疫应答；安全性；

【参考文献】
[1]毛慧.人口老龄化对河南产业结构的影响研究[D].北京林业大学,人口、资源与环境经济学,2013,硕士.
[2]景小靖.北京市城乡失业人员再就业培训政策研究[D].首都经济贸易大学,社会保障,2013,硕士.
[3]李金润.来安县采石场环境综合治理研究[D].安徽大学,行政管理,2014,硕士.
[4]郭红梅.话题熟悉程度对篇章阅读策略选择的影响[D].山西师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[5]杨君锐.逆向启发式开采最大频繁项目集[J].计算机工程,2004,14:116-118.
[6]刘磊.基于Nucleus的远程实时监控系统的研究[D].西安电子科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[7]陆观.指纹识别技术在公安指纹信息系统中的研究及应用[D].东华大学,软件工程（专业学位）,2014,硕士.
[8]袁昕.甘肃敦煌雅丹国家地质公园地质遗迹分类、评价及其可持续发展[D].中国地质大学（北京）,第四纪地质学,2014,硕士.
[9]赵春苗.枯草芽孢杆菌与鼠李糖乳杆菌融合子制备及其对三黄鸡免疫功能及肠道菌群的影响[D].广东海洋大学,动物营养与饲料科学,2013,硕士.
[10]景林波.煤矿微震信号特征及传播规律研究[D].中国矿业大学,安全技术及工程,2014,硕士.
[11]谯真.新农村建设下的农村信贷担保研究[D].中南林业科技大学,农村与区域发展,2013,硕士.
[12]郭力.道路防滑面层——新型交通安全设施[J].交通世界.2005(05)
[13]朱林伟.社区居民需求、科层制要求与居委会的回应[D].华东理工大学,社会学,2013,硕士.
[14]李苏娟.战国时期楚漆器纹饰在平面设计中的应用研究[D].武汉纺织大学,设计艺术学,2014,硕士.
[15]罗兵,黄万杰,杨帅.基于BP神经网络的库存动态预测及其应用[J].重庆大学学报(自然科学版),2005,02:137-140.
[16]贺淑珍,冯建忠.太钢低硅烧结矿的试验研究[J].炼铁.2004(S1)
[17]陈国达,金明生,计时鸣.模具气囊抛光工艺规划方法[J].制造技术与机床,2013,05:25-29.
[18]王海玲.产品功能疲劳问题的研究[D].东北大学,管理科学与工程,2010,硕士.
[19]杜林涓.论网络游戏广告的特征、功能及发展趋势[D].湖南师范大学,传播学,2014,硕士.
[20]陈瑞,林喜荣,丁天怀.基于WBCT的虹膜图像质量评价方法[J].自动化学报,2009,05:618-621.
[21]王建国.基于Contiki OS的无线传感器网络中轻量级IPSec设计与实现[D].北京交通大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[22]林海军.轮状病毒乳鼠动物模型的建立与初步应用[D].厦门大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[23]徐华林.铁路移动通信系统组织方案的介绍[J].邮电设计技术.1997(10)
[24]李燕.滚齿式株间除草机构的设计与仿真[D].北京林业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[25]覃陆华.建筑作品著作权侵权问题研究[D].广东财经大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[26]张红梅.生物质燃油做柴油机代用燃料的研究[D].河南农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.
[27]俞婕.以《近思录》看朱熹与张载的理学差异[D].首都师范大学,中国哲学,2014,硕士.
[28]杨保民,孙明,孙翔.滞后不确定系统的鲁棒稳定调节器设计[J].自动化学报,1994,02:202-208.
[29]岑武.波轮洗衣机内筒生产线关键工艺研究与分析[D].湖北工业大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[30]陈宗霞.乳制品企业社会责任对消费者购买意向影响的实证研究[D].西南大学,企业管理,2013,硕士.
[31]龚智群.基于国产器件的高功率脉冲光纤激光器研究[D].国防科学技术大学,光学工程,2012,硕士.
[32]谭惠娟.福建漳浦诒安堡民居空间的使用方式研究[D].华侨大学,建筑历史与理论,2013,硕士.
[33]范欣.基于义务视角探析我国住房权立体保障体系[D].山东大学,民商法学,2013,硕士.
[34]卢金火.STRIM100~*软件在冷冲模CAD/CAE/CAM上的应用[J].机电一体化.1996(05)
[35]郭浩浩.GABA_B受体介导的JNK激活分子机制及其功能的初步研究[D].华中科技大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[36]江晓筠.论我国钻井平台油污责任保险问题[D].厦门大学,民商法学,2014,硕士.
[37]马菊.新型农村社会养老保险的供求研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2013,硕士.
[38]王殿龙.125KSpS逐次逼近型模数转换器设计[D].复旦大学,集成电路工程,2012,硕士.
[39]夏雪姣.力群木刻版画艺术研究[D].鲁东大学,美术学,2013,硕士.
[40]张莹.初中作文教学研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[41]张萌.中泰文化差异在对泰汉语教学中的正负迁移作用[D].西安外国语大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[42]李力.小学校园危机管理策略研究[D].西南交通大学,行政管理,2014,硕士.
[43]孙计伟.ARM及Linux嵌入式技术在指纹识别系统中的应用研究[D].太原科技大学,电路与系统,2013,硕士.
[44]沈婉婷.我国安乐死立法的正当性分析及其路径选择[D].西南政法大学,行政法学与宪法学（专业学位）,2012,硕士.
[45]王萌.机械式硫化机开合模过程运动学优化[D].山东大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[46]史兴盛.煤化工冷态半实物仿真培训系统的研究与设计[D].杭州电子科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[47]杨泰.La–Mg–Ni系AB_2型贮氢合金相结构及性能的研究[D].内蒙古科技大学,材料学,2013,硕士.
[48]瞿慧萍.CcpA在单核细胞增生李斯特菌中的功能初探[D].华中师范大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[49]王华.DMS公司中国区市场营销策略研究[D].华南理工大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[50]赵雪花.河川径流演变规律的挖掘与识别技术[D].西安理工大学,2005.